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如何結(jié)合需求購買離心機(jī)?PBMC 單核細(xì)胞的密度梯度離心分離篇

更新時間:2020-01-10      點(diǎn)擊次數(shù):3112

      測定細(xì)胞免疫功能首先要從人或動物外周血或組織中獲取有活性的細(xì)胞,如淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞等。血液主要由血清和血細(xì)胞組成,主要包括紅細(xì)胞,白細(xì)胞和血小板等。白細(xì)胞還可以細(xì)分為淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等。由于這些細(xì)胞具有簡單的細(xì)胞核,統(tǒng)稱為外周血單核細(xì)胞 (PBMC)。 取得有活性的細(xì)胞應(yīng)根據(jù)不同的實(shí)驗、檢驗和治療的目的,采用不同方法,需要考慮的因素有:1細(xì)胞純度,2細(xì)胞獲得量,3細(xì)胞活力,4使用方法的簡易程度和本室條件等。PBMC 單核細(xì)胞可通過 Ficoll 密度梯度離心的方法,從血液中進(jìn)行分離。

       在 Ficoll 密度梯度離心的過程中,需要注意的有:
● 使 Ficoll-Paque Plus 和 PBS 升至室溫,并用 70% 乙醇消毒血袋外部,良好的溫度 (18-20℃) 控制有利于穩(wěn)定 Ficoll 的密度,可以實(shí)現(xiàn)更好的分離效果
● 血液與 PBS 的比例保持 1:1,擰緊蓋后顛倒混合幾次
● 可以使用 ep 25 mL 錐底管,并輕輕的將血液/PBS 混合物鋪置 Ficoll 上
● 離心參數(shù):400 x g, 20 ℃,加減檔 0/0,防止離心結(jié)束后的剎車震動,防止產(chǎn)生重懸,更利于良好分層。隨后開啟“Atset”功能,可以在達(dá)到轉(zhuǎn)速后開始計時,離心 30 分鐘
● 使用 PBS 洗滌細(xì)胞,離心除去殘余的 Ficoll 液,400 x g, 20 ℃,10 分鐘,重復(fù)幾次
       綜上所述,一臺搭配了適當(dāng)?shù)乃睫D(zhuǎn)子的 5804R 多用途離心機(jī)會是您入門級的選擇,同時又不失其專業(yè)性。
 

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