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薄層層析板詳細操作過程

更新時間:2013-12-25      點擊次數(shù):1244

顯色
噴顯色劑顯色zui重要是有好的霧化器。

點樣
盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性,只用1微升的點樣管。這樣,點的斑點較小,展開的色譜圖分離度好,顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好,樣品溶液含水量大,點樣斑點擴散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點好樣的薄層層析板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干。

展開劑配制
選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗,強烈振搖使混合液充分混勻,放置,如果分層,取用體積大的一層作為展開劑。不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開缸,振搖展開缸來配制展開劑?;旌喜痪鶆蚝蜎]有分液的展開劑,會造成層析的*失敗。各組成溶劑的比例準確度對不同的分析任務(wù)有不同的要求,盡量達到實驗室儀器的zui高度,比如:取1ml的溶劑,應(yīng)使用1ml的單標移液管,薄層層析板移液管應(yīng)符合計量認證要求,盡管多數(shù)時候這不是必須的。

展開系統(tǒng)的飽和
一般使用的是雙槽的展開缸,一槽用來放展開劑,另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開的板放入兩槽間的平臺,斜架著,蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸,并使薄層板吸附蒸氣達到飽和,防止邊沿效應(yīng),飽和時間在半個小時左右。展開時難免要打開蓋子把薄層層析板放入展開劑中,不過對薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大,當然動作應(yīng)該盡量輕、快。

溫濕度的控制
溫濕度對薄層層析板薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下,通常溫度越低分離越好,較難的分離需在低溫下分離,例如人參皂苷。濕度的影響,估計主要是影響薄層板的吸附能力,導(dǎo)致選擇性(容量因子)的變化,濕度應(yīng)根據(jù)實際情況確定。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜,濕度控制是通過在另一展開槽放置相應(yīng)濃度的硫酸。
 

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